Taj dan pravoslavni hrišćani posvećuju preminulim precima i, prema tradiciji, obilaze grobove, prislužuju svijeće i služe pomene. 

Vjernici na ovaj dan upućuju molitve Bogu za milost prema upokojenima i oprost grijehova koje su počinili za života. 

Zadušnice uvijek padaju u subotu kada se tim povodom obavljaju bogosluženja posvećena upokojenima, jer je Isus Hristos, dan uoči Vaskrsenja, koje se uvijek slavi u nedjelju, proveo u grobu.

U Crkvi se na zadušnice pominju i riječi Svetog Jovana Zlatoustog, jednog od najvećih bogoslova iz Četvrtog vijeka: "Pomozite pokojnima i pominjite ih. Ne oklijevajte, dakle, da pomognete onima koji su otišli i prinesite vaše molitve za njih". 

Osim Duhovskih, u kalendaru Srpske pravoslavne crkve postoje još zimske ili Mitrovske, zatim proljećne, koje padaju sedmicu prije početka Velikog ili Časnog posta, i Miholjske ili jesenje zadušnice.